【造模機制】

月桂酸鈉注人大鼠頸內動脈,可直接損傷腦穿支動脈內皮細胞,導致了血管透性的增加。損傷后的小血管壁,可觸發血小板黏附和聚集,與凝血系統共同參與血栓的形成,所形成的微血栓位于受損小動脈的原位,且包含有纖維蛋白絲。從而建立大鼠腔隙性腦梗死模型。

【造模方法】

1.模型的制備方法 選用成年SD雄性大鼠37只,體重270~330g 隨機分為A.B.C.D四組。參照Toshima等模型的制備方法,實驗第1天, A組大鼠用10%水合氯醛按0.4mg/100g腹腔麻醉,分離右頸總動脈、頸內和頸外動脈,結扎同側頸動脈,甲狀腺上動脈,翼腭動脈及頸外動脈遠心端。PE50導管插入頸外動脈,向頸內動脈內緩慢注人含100μg月桂酸鈉的鹽溶液 0.1ml,期間用微動脈夾暫時夾閉頸總動脈。術畢,結扎頸外動脈。第1次注入月桂酸鈉48小時后,進行第2次(第3天)注射:麻醉后暴露頸總動脈,插入PE50導管,緩慢注入100μg月桂酸鈉鹽溶液0.1ml后結扎頸總動脈。B組為假手術組,只注射等量的生理鹽水0. 1ml,而不含月桂酸鈉。A.B兩組于實驗第6天處死,C組大鼠于第1次注入100μg月桂酸鈉5小時后處死,D組于第1次注入月桂酸鈉后1小時,5小時分別處死。

2.光學顯微鏡觀察A.B兩組于實驗第6天完成行為學鑒定后處死,10%甲醛固定鼠腦,從前腦額極起,每隔2mm冠狀切片(片厚5pm),共取5片,第3片包含海馬區。組織片行勒克司堅牢藍-HE染色,光鏡下進行組織學分析。C組大鼠腦組織處理如上,腦片行磷鎢酸蘇木精染色。

3.透射電鏡方法D組大鼠麻醉后用2.5％戊二醛心臟灌注、斷頭、取腦。選擇注藥側大腦中動脈、海馬、皮質、丘腦區取材,組織塊按透射電鏡技術制備成半薄片和超薄片,并在電鏡下觀察。

4、選用3種行為學方法分別于實驗第3天(第2次注射月桂酸鈉前)和第6天用3種行為學方法對A.B兩組大鼠進行評價。

元圍縮,注藥側大腦中動脈內皮未受損。

【模型特點】在第1次注入月椎酸鈉后5小時,光鏡下大鼠腦片磷鎢酸蘇木精染色顯示纖維蛋白絲阻塞飪藥側穿支動脈。電鏡下顯示毛細血管內皮損傷、星形細胞腫脹及神經元固縮,注藥側大腦中動脈內皮未受損。第2次注入月柱酸鈉后72小時大多數鼠表現有行為學異常，與假手術組比較差異有最著性意義(P<0.01);勒克司堅牢藍-HE 染色顯示,大腦皮質、海馬、丘腦有多發小梗死灶。

【應用范圍】該模型適用于腔瞭性腦梗死的病理、生理和可能的治療研究。可以建立腩梗死血瘀證模型,可以從保護血管內皮細胞功能著手深入研究腦梗死發病機制及活血化瘀防治腦梗死機制,進一步開發防治腦梗死的新的中藥制劑。

【注意事項】

1.造模成功的關鍵在于月桂酸鈉給藥劑量和給藥時間應在實驗第1天、第3天注入右側頸內動脈內,給藥劑量用100ug/飲,實驗第6天處死動物。這是造成穿支動脈內皮損害,并能在原位形成小梗死灶,同時對大腦中動脈不造成損害的合適條件。

2、應采用多種指標判定模型效果和成功率從模型動物的行為表現,梗死灶形態學和病理學及血液流變學等方面考察,大鼠可產生一定程度的腦梗死和血瘀證表現,造模成功率為90.9%。

【模型評估】腔隙性腦梗死(LI)為缺血性腦卒中重要的一型。該模型國內報道極少,是一種新的急性腦梗死造模方法。造模后第6天有多發的小梗死灶存在,病變多分布于丘腦,海馬、皮質,符合臨床L1病灶的分布特點。梗死灶大小也符合臨床LI的診斷標準。建立的模型對研究LI的病理生理和開發針對性強的神經保護劑具有一定的價值。對此模型進行慢性期的行為學設計無疑為臨床血管性癡呆的研究提供又一可能的工具。

用同法建立的腦梗死血瘀證模型其穩定性和重復性較好,能在大腦中動脈的供血區產生恒定的梗死灶,適合進行中醫藥防治腦梗死血瘀證研究。

此模型較之以前的模型具有如下的一些優點:

①在實驗中,并不永久性地結扎翼腭動脈,而是暫時夾閉它,這樣翼腭動脈的再通可以避免頸內動脈內血栓的形成,保證再灌流,其做法并不影響梗死率;

②實驗無需開顱,操作簡便,創傷性小,因手術操作而導致的死亡率幾乎為0

③血管內皮的損害及緊接著血栓的梗阻都是有選擇性地發生在中腦動脈的一些小分支;

④梗死體積及神經功能的癥狀是穩定的。因此,該模型為進一步探討血管內皮細胞與具,值得推廣。